FIB 1-11小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系
FIB 1-11小鼠B淋巴細胞雜交瘤細胞系是纖維相關(guān)單克隆抗體制備與纖維化疾病研究領(lǐng)域的重要細胞模型,憑借穩(wěn)定分泌纖維特異性抗體、優(yōu)異的纖維抗原識別能力及良好的體外培養(yǎng)性能,在纖維化疾病分子檢測、相關(guān)診斷試劑研發(fā)及纖維免疫學(xué)研究中應(yīng)用廣泛,為纖維相關(guān)單克隆抗體的獲取與功能探索提供了可靠載體。
來源與背景:該細胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合產(chǎn)物,通過經(jīng)典雜交瘤技術(shù)篩選克隆獲得。其建立過程是將經(jīng)纖維特異性抗原免疫后的小鼠 B 淋巴細胞與永生化骨髓瘤細胞融合,利用 HAT 培養(yǎng)基篩選出成功融合的雜交瘤細胞,再經(jīng)有限稀釋法克隆和抗體纖維靶向性檢測,最終得到能穩(wěn)定分泌針對纖維靶抗原的單克隆抗體的細胞株。這一過程有效解決了多克隆抗體在纖維抗原檢測中特異性不足、交叉反應(yīng)率高的問題,為獲取均一性高、纖維靶向性強的抗體提供了穩(wěn)定來源,自建立以來,在肝纖維化、肺纖維化等疾病的早期診斷及相關(guān)免疫檢測方法的建立中發(fā)揮了重要作用。
細胞特性:形態(tài)上呈現(xiàn)典型的雜交瘤細胞特征,貼壁生長時呈上皮樣多邊形,細胞質(zhì)內(nèi)可見纖維相關(guān)抗原識別相關(guān)顆粒,細胞核大而圓,核質(zhì)比約 1:2.3,約 6% 的細胞可見雙核結(jié)構(gòu),體現(xiàn)融合細胞的形態(tài)特點。核心特性顯著:抗體分泌穩(wěn)定高效,分泌量達 6-12μg/10?細胞 / 24h,連續(xù)傳代 54 次后,抗體分泌能力僅下降 8%,穩(wěn)定性優(yōu)于多數(shù)同類細胞系;纖維抗原結(jié)合特異性高,與纖維靶抗原的結(jié)合常數(shù)(Kd)達 10??M 級別,與非纖維組織抗原的交叉反應(yīng)率低于 0.8%,確保了纖維檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性;增殖能力穩(wěn)健,體外培養(yǎng)倍增時間約 53-59 小時,克隆形成率 37%,腹腔接種 BALB/c 小鼠后,14-20 天可形成腹水,腹水中抗體濃度達 2-5mg/ml,便于批量制備抗體。傳代時采用常規(guī)方法處理,傳代比例 1:3-1:4,當(dāng)細胞密度達到 70%-75% 時需及時傳代,過度密集會導(dǎo)致抗體分泌量下降 17% 左右。
培養(yǎng)條件:適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基,添加 1% 抗生素及 0.2% 纖維組織提取液,培養(yǎng)環(huán)境控制在 37℃、5% CO?飽和濕度。關(guān)鍵培養(yǎng)要點:血清質(zhì)量關(guān)鍵,需使用低內(nèi)毒素胎牛血清(<0.3EU/ml),劣質(zhì)血清會使細胞活力降低 25%,抗體分泌量減少 31%;添加物作用顯著,纖維組織提取液可維持抗體的纖維靶向性,缺失會導(dǎo)致抗體與纖維抗原的結(jié)合率下降 21%;無血清培養(yǎng)適配性較好,在無血清培養(yǎng)基中添加適量的胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白及纖維生長因子,可維持細胞正常生長,且抗體純度能提高至 91% 以上,有利于后續(xù)的抗體純化;腹水制備規(guī)范,小鼠腹腔預(yù)先注射降植烷,7 天后接種 1.0×10?個細胞,15-21 天收集腹水,每只小鼠可收獲 1-4ml 腹水,腹水經(jīng)純化后仍保持對纖維組織的高親和力。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復(fù)蘇后 48 小時貼壁率達 76%,抗體分泌功能恢復(fù) 81% 以上。
檢測鑒定:經(jīng)嚴(yán)格的微生物檢測,無細菌、真菌、支原體污染,符合雜交瘤細胞的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)??贵w亞型鑒定為 IgG1 型,輕鏈為 κ 型;通過 ELISA、免疫組化等方法驗證,該抗體能特異性結(jié)合纖維組織靶抗原,與非纖維組織的交叉反應(yīng)率低于 0.7%;染色體核型分析顯示,其染色體數(shù)目為 81-91 條,融合了親本 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的染色體特征,符合雜交瘤細胞的遺傳學(xué)特性;功能驗證中,將該抗體用于肝纖維化組織切片免疫染色時,能特異性識別纖維靶抗原,陽性信號集中于纖維化區(qū)域,背景干擾低,證實其在纖維化疾病檢測中的實用性。
應(yīng)用領(lǐng)域:在纖維化疾病分子檢測方面,基于該細胞系分泌的抗體構(gòu)建的 ELISA 試劑盒,檢測靈敏度達 0.55ng/ml,線性范圍寬,適用于血清、纖維組織等多種樣本類型中纖維靶抗原的定量分析;在纖維化診斷試劑研發(fā)中,利用該抗體開發(fā)的免疫熒光探針,可用于肝、肺等組織病理切片中靶抗原的可視化檢測,對肝纖維化的診斷符合率達 88%。在纖維免疫學(xué)研究中,可用于纖維抗原表位分析,通過肽掃描實驗確定纖維抗原的特異性結(jié)合區(qū)域,為抗纖維化疫苗設(shè)計提供關(guān)鍵信息。此外,該細胞系可用于優(yōu)化纖維相關(guān)抗體生產(chǎn)工藝,通過調(diào)整懸浮培養(yǎng)的溫度、pH 值等條件,能使抗體產(chǎn)量提升 1.1-1.7 倍,有助于降低纖維相關(guān)單克隆抗體規(guī)?;a(chǎn)的成本,為纖維化疾病的精準(zhǔn)診斷及治療研究提供了重要支持。
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