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技術(shù)文章

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)樣本不顯色解讀

閱讀:50          發(fā)布時間:2025-7-21

ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)中,如果標(biāo)準(zhǔn)品顯色但樣本不顯色,可能由以下幾個原因造成:

1. 樣本保存或處理不當(dāng):如果樣本在保存或處理過程中發(fā)生了降解,或者樣本中待檢測的抗原濃度過低,都可能導(dǎo)致樣本不顯色。

2. 抗體特異性或濃度問題:使用的捕獲抗體和檢測抗體可能與樣本中的抗原不匹配,或者抗體濃度不足,導(dǎo)致特異性結(jié)合不充分。

3. 孵育條件不適宜:孵育溫度、時間或緩沖液條件不適當(dāng),可能影響抗原抗體的結(jié)合效率。

4. 封閉不充分或封閉液問題:封閉步驟如果未充分進行,可能會導(dǎo)致非特異性結(jié)合增加,從而掩蓋了特異性信號。

5. 顯色時間不足:標(biāo)準(zhǔn)品顯色時間可能比樣本所需時間長,如果樣本孔的顯色時間不夠,也可能導(dǎo)致不顯色。

6. 終止液問題:加入終止液后,如果終止液不正確,可能提前終止了顯色反應(yīng),導(dǎo)致樣本孔不顯色。

7. 顯色劑保存不當(dāng):如果顯色劑如TMB在使用前已經(jīng)變色或氧化,會影響最終的顯色效果。

8. 儀器讀數(shù)問題:酶標(biāo)儀的波長設(shè)置、濾光片選擇或儀器本身的問題,可能影響到樣本孔的讀數(shù)。

解決方法:

1. 檢查樣本保存和處理過程,確保樣本未降解且抗原濃度足夠。

2. 驗證抗體的特異性及濃度,必要時更換抗體。

3. 確保孵育條件符合說明書要求。

4. 仔細(xì)執(zhí)行封閉步驟,如果封閉不充分,嘗試增加封閉時間或調(diào)整封閉液的濃度。

5. 確認(rèn)顯色時間,確保樣本孔達(dá)到顯色的峰值。

6. 使用正確的終止液,并在加入終止液后立即讀數(shù)。

7. 檢查顯色劑的保存條件,確保其未被氧化。

8. 核對酶標(biāo)儀的設(shè)置,確保波長和濾光片選擇正確,并考慮儀器校準(zhǔn)。

9. 如果是新試劑或新操作,可以嘗試對照標(biāo)準(zhǔn)品操作,看是否能重現(xiàn)顯色,從而排除操作步驟中的問題。

通過上述步驟,可以排查并解決樣本不顯色的問題。


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