大鼠血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒使用說明書

　　BS-2952大鼠血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒 天津本生

　　一、試劑盒原理

　　大鼠血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)進行檢測。該方法基于特異性抗體與PDGF分子的結合反應，通過酶催化底物顯色來定量測定樣本中PDGF的含量?。

　　實驗原理具體為：將抗大鼠PDGF單克隆抗體預先包被在酶標板上，加入標準品或樣本后，其中的PDGF會與固相抗體結合。隨后加入生物素化的檢測抗體，形成"抗體-抗原-抗體"復合物。再加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的鏈霉親和素與生物素結合，最后加入底物TMB顯色。在HRP催化下，TMB顯藍色，加入終止液后變?yōu)辄S色，顏色的深淺與樣本中PDGF濃度成正比，通過測定450nm處的吸光度(OD值)即可計算出PDGF含量?。

　　二、試劑盒組成

　　本試劑盒通常包含以下主要組分(具體組成可能因不同廠家有所差異)：

　　預包被酶標板?：96孔或48孔，已包被抗PDGF抗體?

　　PDGF標準品?：凍干粉或溶液形式，濃度通常為2000-2700ng/L，使用前需用標準品稀釋液重建?

　　樣品稀釋液?：用于稀釋樣本和標準品?

　　生物素化檢測抗體?：特異性識別PDGF的抗體?

　　酶結合物?：HRP標記的鏈霉親和素?

　　TMB底物溶液?：包含A液和B液，顯色用?

　　終止液?：通常為硫酸溶液，用于終止反應?

　　濃縮洗滌液?：20×或25×濃縮，使用前需稀釋?

　　封板膜?：防止蒸發(fā)和污染?

　　三、樣本收集與處理

　　1. 樣本類型

　　本試劑盒適用于檢測大鼠血清、血漿(EDTA、肝素或檸檬酸鹽抗凝)、細胞培養(yǎng)上清液和組織勻漿等樣本中的PDGF含量?。

　　2. 樣本收集

　　血清?：全血室溫放置2小時或4℃過夜后，1000×g離心20分鐘取上清?

　　血漿?：使用抗凝管采集后30分鐘內，1000×g離心15分鐘?

　　細胞上清?：1000×g離心10分鐘去除顆粒?

　　組織勻漿?：加入適量生理鹽水勻漿后，1000×g離心10分鐘取上清?

　　3. 樣本保存

　　樣本在2-8℃可保存48小時，如需長期保存應分裝后于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融?。檢測前血清樣本通常需用稀釋液作1:5至10倍稀釋?。

　　四、實驗操作步驟

　　1. 試劑準備

　　標準品配制?：將凍干標準品用1ml蒸餾水或標準品稀釋液重建，按說明書進行系列稀釋(通常設7-8個濃度梯度)?

　　洗滌液配制?：將濃縮洗滌液用蒸餾水按1:20稀釋(如1ml濃縮液加19ml水)?

　　抗體工作液配制?：按說明書比例用檢測稀釋液稀釋生物素化抗體和酶結合物?

　　2. 檢測程序

　　加樣?：每孔加入100μl標準品或處理好的樣本，設置空白對照孔?

　　孵育?：37℃溫育30-120分鐘(具體時間依試劑盒說明)?

　　洗滌?：棄去孔內液體，每孔加滿洗滌液靜置1分鐘后棄去，重復4-6次，最后在吸水紙上拍干?

　　加檢測抗體?：每孔加入100μl生物素化抗體工作液，37℃孵育60分鐘?

　　洗滌?：同步驟3?

　　加酶結合物?：每孔加入100μl HRP標記的鏈霉親和素，37℃孵育30分鐘?

　　洗滌?：同步驟3?

　　顯色?：每孔加入100μl TMB底物，37℃避光反應15分鐘?

　　終止?：每孔加入100μl終止液，輕輕混勻?

　　讀數(shù)?：30分鐘內在酶標儀450nm處測定OD值(建議使用630nm作為參考波長)?

　　五、結果計算

　　空白校正?：所有OD值應減去空白對照孔的OD值?

　　繪制標準曲線?：以標準品濃度為橫坐標(對數(shù)坐標)，相應OD值為縱坐標(線性坐標)，在坐標紙上繪制標準曲線?

　　濃度計算?：

　　根據(jù)樣品OD值在標準曲線上查出對應的PDGF濃度?

　　若樣本經(jīng)過稀釋，需乘以相應的稀釋倍數(shù)?

　　也可通過回歸方程計算濃度：使用標準品的濃度和OD值計算直線回歸方程，將樣本OD值代入方程求出濃度?

　　六、注意事項

　　試劑保存?：未使用的試劑應嚴格按說明書要求保存(通常2-8℃)，避免反復凍融?

　　溫度平衡?：所有試劑和樣本使用前應室溫平衡30分鐘?

　　操作規(guī)范?：

　　不同批號試劑不可混用?

　　加樣時避免觸碰孔壁和產生氣泡?

　　嚴格控制各步驟的孵育時間和溫度?

　　洗滌要充分，防止交叉污染?

　　樣本處理?：

　　避免使用溶血、高血脂或反復凍融的樣本?

　　組織樣本應充分勻漿?

　　安全防護?：

　　TMB底物有毒性，終止液有腐蝕性，應避免接觸皮膚?

　　實驗廢棄物應按規(guī)定處理?

　　七、性能參數(shù)

　　靈敏度?：最小檢測濃度通常小于15pg/ml?

　　檢測范圍?：常見為15.625-1000pg/ml或31.2-2000pg/ml?

　　注：以上資料僅供參考，不作為具體依據(jù)，如果完整產品說明請咨詢技術老師或品牌供應商。

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