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解析RIPA裂解液配方及其蛋白提取應用-賽默飛

閱讀:69      發(fā)布時間:2025-7-10
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Thermo Scientific RIPA 裂解和提取緩沖液是一種用于培養(yǎng)的哺乳動物細胞的常用細胞裂解試劑的高質量、即用型且披露的配方。

 

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RIPA 裂解緩沖液的特點:

•便利— 即用型解決方案;無需自行裝配和制備組成部分

•靈活— 可與許多應用兼容,包括報告基因檢測、蛋白檢測、免疫檢測和蛋白純化

•通用— 可提取細胞質、細胞膜和細胞核蛋白

•披露的配方— 不含專有組成部分,用戶可全面控制和了解可能存在的兼容性問題

 

RIPA 緩沖液可從培養(yǎng)的哺乳動物細胞(包括鋪板細胞和團狀懸浮細胞)中高效裂解并提取蛋白。該常用試劑可提取細胞膜、細胞核和細胞質蛋白,并可與許多應用兼容,包括報告基因檢測、Thermo Scientific BCA 蛋白檢測、免疫檢測和蛋白純化。Thermo Scientific Halt 蛋白酶抑制劑混合物(產品編號 78430)和 Halt 磷酸酶抑制劑混合物(產品編號 78420)等抑制劑也可與該 RIPA 緩沖液配方兼容,可在使用前添加以防止蛋白水解并保持蛋白磷酸化。

 

RIPA 緩沖液的名稱來源于為其開發(fā)這種緩沖液的原始應用:放射免疫沉淀測定。盡管目前在實驗室中很少使用這種同位素檢測方法,但該裂解緩沖液配方的首字母縮略詞已被廣泛使用。RIPA 細胞裂解試劑可從各種細胞類型中高效提取蛋白,因為其含有三種非離子型和離子型去污劑。該去污劑配方的一大劣勢是,與其他裂解試劑相比,其與某些下游應用相對不兼容。

 

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RIPA 裂解和提取緩沖液規(guī)格

 

相關產品

1、Pierce™ IP 裂解緩沖液

Thermo Scientific Pierce IP 裂解緩沖液針對細胞裂解物的產量、純度以及與免疫沉淀(IP 和 Co-IP)(作為與細胞裂解物相關的下游應用)的兼容性進行了優(yōu)化。

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IP 裂解緩沖液的特點:

•經過優(yōu)化,可與各種免疫沉淀和牽出測定兼容

• 與各種蛋白測定、報告基因測定和免疫檢測程序兼容

• 現成的配方,可有效提取細胞質、細胞膜和細胞核蛋白

• 溫和的配方可幫助保持蛋白復合物用于免疫共沉淀

• 不會釋放可導致樣品高粘性的基因組 DNA

 

IP 裂解緩沖液是一種基于改良 RIPA 緩沖液配方(不含 SDS)的哺乳動物全細胞裂解試劑。這種中等強度裂解緩沖液可高效溶解細胞蛋白,但不會像一般 RIPA 緩沖液那樣釋放染色體組 DNA 或破壞蛋白復合物。Pierce IP 裂解緩沖液經過特殊配方,可用于各種牽出測定和免疫沉淀檢測。

 

Pierce IP 裂解緩沖液可從孔板細胞和經懸浮培養(yǎng)液粒化的細胞中有效裂解出培養(yǎng)的哺乳動物細胞。該裂解緩沖液經過優(yōu)化可用于各種牽出測定和免疫沉淀檢測,還可與很多其他應用兼容,包括 Thermo Scientific Pierce BCA 和 660 nm 蛋白測定、蛋白純化和各種免疫檢測(如 ELISA、Western 印跡)。

 

Pierce IP 裂解緩沖液由 25 mM Tris-HCl pH 7.4、150 mM NaCl、1 mM EDTA、1% NP-40 和 5% 甘油組成。該緩沖液不含蛋白酶或磷酸酶抑制劑;但是如果需要,可在使用前添加各種抑制劑,如 Thermo Scientific Halt 蛋白酶抑制劑混合物或磷酸酶抑制劑混合物,以防止蛋白水解并保持蛋白磷酸化。

 

2、M-PER™ 哺乳動物蛋白提取試劑

Thermo Scientific M-PER哺乳動物蛋白質抽提試劑用于從培養(yǎng)的哺乳動物細胞中高效抽提總可溶性蛋白。

 

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M-PER哺乳動物蛋白抽提試劑的特點:

• 作用溫和— 溫和的除垢劑裂解,產生的抽提物直接與考馬斯(Bradford)和BCA蛋白定量分析試劑或SDS-PAGE兼容

• 兼容性強— 抽提的可溶性蛋白處于非變性狀態(tài),可直接用于免疫沉淀反應和其他親和純化過程

• 不含胺基并且可透析— 確保其與隨后的分析系統(tǒng)兼容

• 方便— 貼壁細胞直接在板上裂解或者在剝離和洗滌后懸浮于溶液中

• 非變性— 維持熒光素酶、β-半乳糖苷酶、CAT和其他報告基因的活性,與其他供應商的產品和冷凍/解凍方法一樣好或更出色

 

這款完整的細胞裂解試劑是一種非變性除垢劑配方,可在短短5分鐘內溶解細胞膜并抽提總可溶性細胞蛋白。M-PER試劑很少或根本不需要機械破碎,并且相比冷凍/解凍循環(huán)方法和超聲波破碎方法可以獲得更多的蛋白。這種哺乳動物細胞裂解試劑是如此有效,不需要從培養(yǎng)皿上剝離貼壁細胞,可以簡單而直接地在生長細胞的24孔和96孔板上進行裂解和分析。最終無論是貼壁細胞還是懸浮細胞的裂解產物與很多下游分析都兼容,包括免疫分析、酶分析和各種常見的報告基因分析。

 

在任何蛋白質組學分析過程中,蛋白質抽提通常都是關鍵的第一步,首先細胞必須裂解,以便打開細胞并釋放出感興趣的蛋白質。常用的幾種物理裂解細胞方法包括機械破壞、液體均質化、超聲波裂解、冷凍/解凍循環(huán)和手工研磨。

 

 

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賽默飛世爾科技(中國)有限公司

 


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