酶聯(lián)免疫分析儀即酶聯(lián)免疫檢測儀。是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器又稱微孔板檢測器。可簡單地分為半自動和全自動兩大類,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。測定一般要求測試液的終體積在250μL以下,用一般光電比色計無法完成測試,因此對酶聯(lián)免疫分析儀中的光電比色計有特殊要求。
1、將標準品和樣品對應的微孔編號,每個標準品和樣品做雙孔平行,并記錄標準品和樣品的位置。
2、在標準品孔中加入50µl各標準品溶液,酶標儀在各樣品孔中加入50µl樣品溶液。
3、在所有孔中加入50µl的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光反應30分鐘。
4、小心揭開蓋板膜,甩干孔中液體,用稀釋好的洗滌液(250μl/孔)充分洗滌微孔板3次,在吸水紙上拍干(拍干后未清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
5、酶聯(lián)免疫分析儀在所有孔中加入100µl的酶標二抗,酶標儀用蓋板膜封板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光反應30分鐘。取出酶標板,按步驟4洗板5次。
6、洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl底物液A,再加50µl底物液B,輕微晃動反應板使之混勻,25℃環(huán)境避光顯色15分鐘(在顏色淺的情況下可適當延長反應時間,但總顯色時間不要超過30分鐘)。
7、每孔中加入50µl終止液,輕輕晃動使之混勻,在450nm(建議使用雙波長450/630nm)下檢測吸光度,結果在5分鐘內讀取。
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