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氨基酸自動分析儀通過離子交換色譜與柱后衍生技術，可實現(xiàn)食品、生物樣本中氨基酸的精準定量。本文以蛋白質水解樣品檢測為例，系統(tǒng)梳理其操作步驟與關鍵注意事項，助力用戶高效完成分析任務。
一、前期準備：試劑與儀器校準
1.試劑配置
緩沖液：按說明書配制pH2.2、3.3、4.0的檸檬酸-磷酸鈉緩沖液，0.45μm濾膜過濾后超聲脫氣15分鐘。
衍生試劑：稱取茚三酮溶于乙二醇甲醚，加入氯化亞錫（抗氧化劑），現(xiàn)配現(xiàn)用，避光保存。
標準品：用0.02N鹽酸溶解氨基酸混合標準品，配制成0.5-10μmol/L梯度溶液。
2.儀器檢查
開啟氮氣（壓力0.05-0.1MPa）、純水機及儀器電源，預熱30分鐘。
檢查泵頭無氣泡、色譜柱連接緊密，用超純水沖洗管路至基線平穩(wěn)。
二、樣品處理：水解與衍生化
1.蛋白質水解
稱取50-100mg樣品于水解管，加入10mL 6N鹽酸及0.5mL苯酚（指示劑），充氮氣后密封。
110℃水解22-24小時，冷卻后過濾，取1mL濾液60℃真空干燥，用0.02N鹽酸復溶至10mL，過0.22μm濾膜。
2.游離氨基酸提取
血清、尿液等液體樣品直接與4%磺基水楊酸按1:3混合，4℃離心（12000rpm，10分鐘），取上清液稀釋至檢測范圍。
三、儀器操作：參數(shù)設置與運行
1.方法建立
在軟件中設置梯度洗脫程序：0-10分鐘緩沖液A（pH2.2），10-30分鐘線性切換至B（pH3.3），30-50分鐘切換至C（pH4.0），流速0.45mL/min。
衍生溫度115℃，檢測波長570nm（主）、440nm（副），進樣量20μL。
2.序列運行
將標準品與樣品按順序放入自動進樣器，啟動序列。儀器自動完成進樣、分離、衍生及檢測，生成色譜圖。
四、數(shù)據(jù)分析與報告生成
1.定性定量
通過保留時間比對標準品色譜圖，定性氨基酸種類；以外標法或內標法計算濃度，回收率需達95%-105%。
2.報告輸出
軟件自動生成Excel或PDF報告，包含樣品名稱、濃度、RSD值及色譜圖。異常峰需手動檢查是否為雜質或共洗脫峰。
五、儀器維護與注意事項
1.日常維護
每日用超純水沖洗泵及管路，每周更換保護柱芯，每月校準儀器線性度（R2≥0.999）。
2.故障處理
若基線漂移，檢查茚三酮溶液是否氧化；若峰形拖尾，用0.1N NaOH沖洗色譜柱30分鐘。
氨基酸自動分析儀通過標準化操作流程，可實現(xiàn)ppb級檢測限與±2% RSD的重復性。從樣品前處理到數(shù)據(jù)輸出，每一步均需嚴格遵循參數(shù)設置與質量控制要求，以確保分析結果的準確性與可靠性。
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