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北京百泰派克生物科技有限公司
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新手指南:如何開始CUT&Tag分析?

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產(chǎn)品型號

品       牌百泰派克

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更新時(shí)間:2025-07-22 13:34:33瀏覽次數(shù):30次

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新手指南:如何開始CUT&Tag分析?檢測技術(shù)服務(wù): CUT&Tag作為一種染色質(zhì)分析技術(shù),以其靈敏度高、背景低、操作便捷而廣受歡迎。然而,許多剛接觸這一技術(shù)的新手可能會感到迷茫:如何快速上手并成功完成CUT&Tag實(shí)驗(yàn)?本文為CUT&Tag新手提供詳細(xì)的入門指南,涵蓋了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、試劑選擇、實(shí)驗(yàn)步驟及數(shù)據(jù)分析,幫助您輕松開啟CUT&Tag研究之路。   一、明確實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)與設(shè)計(jì) 在啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)前,首先需

新手指南:如何開始CUT&Tag分析?檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

CUT&Tag作為一種染色質(zhì)分析技術(shù),以其靈敏度高、背景低、操作便捷而廣受歡迎。然而,許多剛接觸這一技術(shù)的新手可能會感到迷茫:如何快速上手并成功完成CUT&Tag實(shí)驗(yàn)?本文為CUT&Tag新手提供詳細(xì)的入門指南,涵蓋了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、試劑選擇、實(shí)驗(yàn)步驟及數(shù)據(jù)分析,幫助您輕松開啟CUT&Tag分析之路。


一、明確實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)與設(shè)計(jì)

在啟動(dòng)實(shí)驗(yàn)前,首先需要明確研究目的:

1、研究的染色質(zhì)靶點(diǎn)(組蛋白修飾或轉(zhuǎn)錄因子)

2、樣本類型與細(xì)胞數(shù)量(推薦從1000-5000個(gè)細(xì)胞起步)

3、控制組選擇(IgG抗體或輸入樣本)

明確以上要素后,即可進(jìn)行下一步的具體實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)。


二、bìbèi試劑與耗材清單

CUT&Tag分析成功的關(guān)鍵是選擇合適的試劑和耗材,以下為基礎(chǔ)bìbèi材料:

1、關(guān)鍵試劑

(1)一抗(Primary Antibody):高特異性,推薦ChIP-grade抗體。

(2)蛋白A/G-Tn5轉(zhuǎn)座酶:核心酶復(fù)合物,推薦選用zhuānyè品牌,如百泰派克生物科技提供的高效穩(wěn)定Tn5融合蛋白。

(3)透化緩沖液與活化緩沖液:推薦使用商業(yè)試劑盒以減少誤差和提高穩(wěn)定性。


2、耗材準(zhǔn)備

(1)低吸附管(low-bind tubes)

(2)PCR管(兼容qPCR與高通量測序)

(3)PCR試劑盒(高保真DNA聚合酶)

(4)DNA純化試劑盒


三、CUT&Tag實(shí)驗(yàn)詳細(xì)步驟解析

下面逐步解析CUT&Tag分析的關(guān)鍵步驟,幫助新手快速上手:

dìyī步:細(xì)胞樣本處理與透化

收集細(xì)胞,推薦以PBS緩沖液洗滌1-2次,懸浮于透化緩沖液中孵育10分鐘,使細(xì)胞膜透化,便于抗體進(jìn)入細(xì)胞核。


第二步:特異性一抗孵育

加入特異性一抗,4℃孵育1-2小時(shí)或過夜,確??贵w充分結(jié)合靶蛋白。


第三步:蛋白A/G-Tn5偶聯(lián)酶復(fù)合物孵育

加入蛋白A/G-Tn5融合酶,室溫或4℃孵育1小時(shí),使復(fù)合物jīngzhǔn靶向定位到染色質(zhì)目標(biāo)區(qū)域。


第四步:轉(zhuǎn)座反應(yīng)(染色質(zhì)片段化與標(biāo)記)

加入Mg2?激活緩沖液,反應(yīng)溫度37℃,反應(yīng)時(shí)間通常為5-10分鐘。短時(shí)間的孵育確保高效且jīngzhǔn的片段化,避免過度剪切。


第五步:DNA釋放與PCR擴(kuò)增

加入蛋白酶K并短暫加熱(50-55℃孵育30分鐘,隨后95℃孵育10分鐘),釋放標(biāo)記好的DNA片段。使用PCR反應(yīng)對標(biāo)記好的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增,推薦高保真DNA聚合酶進(jìn)行擴(kuò)增,避免PCR引入的突變或偏差。


四、CUT&Tag測序與數(shù)據(jù)分析入門

CUT&Tag分析成功后,得到的DNA片段需要進(jìn)行高通量測序與分析。數(shù)據(jù)分析一般包括以下步驟:

1、測序平臺選擇

常用Illumina平臺進(jìn)行高通量測序,推薦測序深度為每個(gè)樣本1000萬-2000萬reads即可滿足多數(shù)分析需求。


2、數(shù)據(jù)質(zhì)控(Quality Control)

使用FastQC、MultiQC工具進(jìn)行數(shù)據(jù)質(zhì)量檢測和評估。


3、數(shù)據(jù)比對與峰值(Peak)鑒定

常用的軟件包括:

(1)Bowtie2/BWA:進(jìn)行測序片段比對至參考基因組。

(2)MACS2:CUT&Tag常規(guī)使用的峰值檢測工具。


4、下游分析與可視化

使用Integrative Genomics Viewer(IGV)可視化峰值和染色質(zhì)分布情況。使用差異分析工具,如DESeq2或EdgeR,分析不同條件或細(xì)胞群體之間的表觀遺傳差異。


五、新手常見問題

1、實(shí)驗(yàn)背景過高怎么辦?

盡可能減少反應(yīng)時(shí)間,尤其是轉(zhuǎn)座反應(yīng)環(huán)節(jié)。使用經(jīng)驗(yàn)證的高質(zhì)量抗體,避免非特異結(jié)合。


2、擴(kuò)增效率低,文庫DNA濃度不足?

可適當(dāng)增加PCR循環(huán)次數(shù)(一般10-15個(gè)循環(huán)足夠)。檢查蛋白A/G-Tn5酶的活性及實(shí)驗(yàn)步驟的正確性。


為幫助科研人員高效開展CUT&Tag分析,百泰派克生物科技精心優(yōu)化實(shí)驗(yàn)流程,提供高質(zhì)量的CUT&Tag技術(shù)支持:


  • 提供高純度蛋白A/G-Tn5融合酶,確保實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定性和高效性。

  • 嚴(yán)格質(zhì)控的抗體庫,專為CUT&Tag實(shí)驗(yàn)優(yōu)化設(shè)計(jì)。

  • 全面的技術(shù)支持服務(wù),協(xié)助新手迅速排除實(shí)驗(yàn)障礙,快速獲得可靠數(shù)據(jù)。


新手科研人員只需遵循上述步驟,結(jié)合高質(zhì)量的試劑與技術(shù)支持,便可輕松完成從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到數(shù)據(jù)分析的全流程。百泰派克生物科技致力于為科研人員提供jīngzhǔn可靠的CUT&Tag分析服務(wù),幫助科研人員順利開啟表觀遺傳學(xué)研究新篇章。從現(xiàn)在起,和百泰派克生物科技一起,邁出CUT&Tag研究dìyī步,開啟更高效、更jīngzhǔn的表觀遺傳探索之路吧!


百泰派克生物科技特色項(xiàng)目


一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析,提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù),包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù),對蛋白序列進(jìn)行分析。


※服務(wù)優(yōu)勢:

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。



二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺結(jié)合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù),助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。


※服務(wù)優(yōu)勢:

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法,適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高,實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析,分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。



三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析,采用金屬元素標(biāo)記物(通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體)標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子,然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞,再用電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜,zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號分子表達(dá)量。


※服務(wù)優(yōu)勢:

1.技術(shù)*,*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù),避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題??稍趩渭?xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征,百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大,成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右,而流式質(zhì)譜技術(shù)一次(單樣本)就可分析至少10^5的細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高,且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景;

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外,質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾;

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。



四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析,可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標(biāo)。



五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù),MALDI TOF,高效色譜分離技術(shù),提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析,到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù),幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。



百泰派克生物科技七大檢測平臺

新手指南:如何開始CUT&Tag分析?




百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則,通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證,建立了完備的質(zhì)量體系,數(shù)據(jù)冷熱/異地備份,設(shè)備定期計(jì)量/期間核查,軟件審計(jì)追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù),支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系,zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù);

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可,為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù);

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等;

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺,滿足您一站式服務(wù)需求;

5.服務(wù)3000+企業(yè),10000+客戶的選擇;

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!



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